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ibidi科普知識|細胞流體狀態(tài)下的培養(yǎng)小常識

更新時間:2023-03-31   更新時間:2023-03-31   點擊次數(shù):1382次

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1.哪些特定應用使用µ-Slide VI 0.1?


如果實驗中的細胞數(shù)量有限(例如當使用原代小鼠細胞時),或者使用最少量的試劑做進行免疫熒光,建議使用µ-Slide VI 0.1?。對于灌注實驗,µ-Slide VI 0.1?會產生-較-高-水-平的剪切應力。


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2. µ-Slide內的流型是Y型湍流嗎?


不是,當使用標準流速和水性介質時,在小通道中無法真正實現(xiàn)湍流特性。無量綱雷諾數(shù)(Re)用于表征不同的流型。層流發(fā)生在低雷諾數(shù),而湍流發(fā)生在高雷諾數(shù)。表明管道和生物容器中層流的臨界雷諾數(shù)是Re=2000。雷諾數(shù)超過Re 4000,最有可能代表湍流。即使在 µ-Slide y-shaped中流速非常高(60毫升/分鐘),雷諾數(shù)仍非常低,約為Re=200,表明層流。


3.多大的剪切應力適合于滾動和粘附分析?


在滾動和粘附分析中,應該使用與內皮細胞層的標準流動調節(jié)相同的參數(shù)。有兩件事需要考慮: 首先,在進行滾動和粘附實驗之前,內皮細胞層應該進行幾天的流動調節(jié)。這個階段的剪切應力可能不同于在滾動和粘附期間施加的剪切應力。其次,在粘附試驗中,灌注培養(yǎng)基的速度也起作用。可能需要改變剪切應力。此外,有必要測試最佳流速/剪切應力。


4.在進行分析之前,應該對細胞層施加多長時間的剪切應力?


細胞對機械剪切應力的適應性反應可長達數(shù)天。因此,根據(jù)您正在研究的標記,可能有必要在分析前對細胞層進行長達幾天的調節(jié)。我們建議在長期實驗中測試感興趣的參數(shù),以確定最佳的測量時間點。


5.應該對內皮細胞施加多大的剪切力?


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生理剪切應力取決于感興趣的組織和血管類型。根據(jù)文獻,人體內的生理剪切應力值在0至60dyn/cm2之間變化。在開始實驗之前,確定適用于所用細胞類型的相關剪切應力范圍至關重要。


6.如何增加流動分析中的細胞數(shù)量?


將通道載玻片串聯(lián)到一個灌流裝置/流體單元中,可以輕松地增加流式檢測中細胞的數(shù)量。應用說明書25(這是個鏈接2022-07-15發(fā)布的公眾號)提供了連接多個通道載玻片到一個流體單元的詳細方案。 此外,將細胞播種到通道底部和頂部,也可以增加通道中的細胞數(shù)量。


7.在開始流動之前,細胞應該附著多久?


在流動開始之前,細胞必須緊密附著在通道載玻片底部。附著時間取決于細胞類型、培養(yǎng)基添加物和表面。例如,在膠原涂層表面上使用HUVEC時,附著時間只需半小時。之后,就可以施加剪切應力。為了使細胞有機會適應新的環(huán)境條件,建議逐步增加剪切應力。


8.硅珠如何再生?


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將硅膠珠加熱即可輕松再生。請按照ibidi泵系統(tǒng)的說明書中的方案進行回收。


9.灌注裝置多久可以重復使用一次?


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我們不建議重復使用灌注組件。每次實驗都使用一個新的灌注裝置,可獲得最可復制和較-可-靠的結果。您可以在ibidi泵系統(tǒng)說明書中找到有關滅菌和清潔的其他信息。


11.如何確保細胞獲得孵化后的空氣?


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ibidi泵系統(tǒng)的設置確保來自培養(yǎng)箱內部的具有正確CO2濃度的無菌空氣驅動灌注。有關詳細說明,請參見ibidi泵系統(tǒng)的說明書。


12.如何計算通道載玻片中懸浮細胞的剪切應力?


在通道中通過液體時,壁面摩擦會導致流動速度呈拋物線形。通道中心的流速將比壁面快。剪切應力僅在通道或管道的壁面上發(fā)生。因此,只有附著在通道壁/底部的細胞才會經(jīng)歷剪切應力。通道中央的懸浮細胞將經(jīng)歷不同的流速,與靠近通道壁的細胞不同。因此,對于懸浮細胞,剪切速率是需要考慮的相關因素,而不是剪切應力。

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